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免疫組化,HE染色
免疫組化服務內容:染色:采用SP法進行免疫組織化學染色。 實驗結果顯微照相
目錄號:MY1,MY2 規格:詢價

免疫組化實驗服務

編號

項目

價格(¥)

完成周期

MY1

病理片免疫組化

40/張(不含一抗)

一周

MY2

組織芯片

100/張(不含一抗)

一周

 

 

 

 

 

 

 

 

免疫組化服務內容:

染色:采用SP法進行免疫組織化學染色

實驗結果顯微照相(DAB顯色的可進行光密度分析需另行收費)

 

免疫組化樣品要求:

蠟切片/冰凍切片/細胞爬片;目的蛋白的一抗(或由鼎國代購)

冰凍切片建議干冰運輸,細胞爬片在固定后低溫運輸。

 

提供結果:

1、提供染色后封固好的切片

2、每張片子提供高倍、低倍鏡顯微照片各一張

3、提供完整的實驗報告

Glu 400X

SP法:DAB顯色,蘇木素復染

 

 

   

免疫組化實驗步驟

1.    石蠟切片用二甲苯脫蠟。(二甲苯各10min/次,2)

2.    梯度酒精水化(100%以乙醇,90%乙醇,75%乙醇,50%乙醇,各5min)后,在蒸餾水中浸泡5分鐘。

3.    0.01M PBSpH=7.4)浸泡5min/次,3

4.     每張切片加1滴或50μl 過氧化酶阻斷劑(北京鼎國,DGSP-試劑1),以阻斷內源性過氧化物酶的活性,室溫下孵育10分鐘。

5.     0.01M PBSpH7.4)浸泡5min/次,3次。

6.     0.01mol/L檸檬酸鹽抗原修復液(CBpH6.0)微波爐最低檔抗原修復10min

7.     每張切片加1 滴或50μl 正常羊非免疫血清,室溫下孵育30 分鐘,封閉后不洗,吸去多余液體。

8.     每張切片加1 滴或50μl的第一抗體(1100倍稀釋),37℃孵育60分鐘。

9.     0.01M PBS浸泡5min/次,3次。

10. 每張切片加1 滴或50μl 生物素標記的第二抗體(生物素標記山羊抗兔IgG,北京鼎國,HF005-11500倍稀釋), 37℃孵育30分鐘。

11. 0.01M PBS浸泡5min/次,3次。

12. 每張切片加1滴或50μl辣根過氧化酶標記鏈親和素溶液(11000倍稀釋,北京鼎國,HD009-1),37℃孵育30分鐘。

13. 0.01M PBS 浸泡5min/次,3次。

14. 每張切片加2滴或100μl新鮮配制的DAB工作液(北京鼎國,DDAB-002),顯微鏡下觀察5~30分鐘。

    15.自來水沖洗,蘇木素復染,脫水、中性樹膠封固

 

染色結果的觀察

1.  陽性結果應定位在細胞相應的部位,在細胞膜表達的抗原陽性結果應定位在細胞膜上,在其他部位的陽性反應均為非特異性染色。不當的抗原修復會導致抗原在組織細胞中定位的改變。根據所檢測抗原的不同,抗原分別定位在:

1)細胞膜:如LCACD3CD20等;

2)細胞質:如Cytokeratin GFAPS100 CgAAFP等;

3)細胞核:如Ki-67ERPRTTF-1HPV-AgCyclin D1TDT等。

2.  組織的周邊、氣泡、刀痕、皺折等部位往往呈現非特異性陽性表達。

3.  染色結果呈陰性并非都是抗原不表達,要考慮是否與組織中的抗原受到破壞有關。

4.  組織切片背景深與下列因素有關:

1)石蠟切片脫蠟不干凈;

2)第一抗體濃度過高或孵育時間過長,溫度過高;

3)顯色劑DAB濃度過高或H2O2太多;

4)抗體不純;

5)抗體孵育后切片清洗不干凈。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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京公網安備 11011402011307號

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